从白血病干细胞水平研究蝎毒多肽提取物逆转多药耐药机制

目的探讨蝎毒多肽(peptide extract from scorpion venom,PESV)对白血病干细胞(leukemic stem cell,LSC)在体内多药耐药(multidrug resistance,MDR)的影响。方法培养K562/A02细胞,在对数生长期收集并经免疫磁珠法分选出K562/A02干细胞备用;40只BABL/c裸鼠,取5只注射K562/A02干细胞形成皮下瘤块备用;采用随机数字表法将35只裸鼠分为正常对照组、模型组、耐阿霉素(Adriamycin,ADM)组、PESV组和ADM+PESV高、中、低剂量组,每组5只。正常对照组不作处理,其余各组包埋瘤块组织,造模后模型组给予1 m L生理盐水腹腔注射,每天1次;ADM组腹腔注射ADM 0.05 mg,隔天1次;PESV组腹腔注射PESV 2μg,每天1次;ADM+PESV高、中、低剂量组腹腔注射ADM 0.05 mg,隔天1次,同时给予PESV(5、2、1μg)腹腔注射,每天1次。给药14天。流式细胞术检测P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp);RT-PCR检测乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)、多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1)m RNA表达;免疫组化法检测乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1);Western blot法检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)蛋白表达;ELISA检测核转录因子NF-κB含量。结果 K562/A02细胞经免疫磁珠分选前后的CD34+CD38-细胞比率分别为31.5%、92.8%,耐药率(IC50)分别为(60.33±10.68)μg/m L、(58.33±9.72)μg/m L,造模裸鼠成瘤率为100%。与模型组比较,ADM组各项检测指标比较,差异无统计学意义(P0.05);PESV组BCRP、MDR1 m RNA和NF-κB因子水平比较,差异均有统计学意义(P0.05);ADM+PESV高、中、低剂量组P-gp值降低,PI3K蛋白表达下调(P0.05),ADM+PESV高、中剂量组BCRP m RNA表达降低,MDR1 m RNA表达升高,差异均有统计学意义(P0.05);ADM+PESV高剂量组PI3K蛋白表达下调,差异有统计学意义(P0.05)。分别与ADM组和PESV组比较,ADM+PESV高剂量组P-gp、BCRP m RNA、MDR1 m RNA、PI3K和NF-κB水平明显均下调,差异有统计学意义(P0.05)。各组ALDH1阳性率比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论 PESV联合ADM具有下调白血病K562/A02干细胞P-gp、BCRP、MDR1、PI3K、NF-κB的表达水平,可以增强白血病K562/A02干细胞在体内对ADM的敏感度,具有逆转其多药耐药作用。     

益气养阴方对白血病干细胞MDR1mRNA和P-gp表达的影响

目的探讨益气养阴方对白血病干细胞多药耐药基因1（multidrug resistance gene 1, MDR1） mRNA和P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）表达的影响。方法从KG1a细胞株中分选出CD34+CD38－KG1a细胞,采用CCK-8法检测益气养阴方联合柔红霉素（daunorubicin, DNR）对KG1a干细胞的抑制率及IC50值;RT-PCR法检测益气养阴方干预KG1a干细胞后MDR1 mRNA的表达量;流式细胞术检测益气养阴方干预KG1a干细胞后各组P-gp表达。结果经过免疫磁珠法分选CD34+CD38－KG1a细胞比例为 （97.2±2.5）%,IC50（48 h）值为（0.50±0.07） μg/mL。与DNR组和对照兔血清+DNR组比较,20、40 μL含药兔血清+DNR组24、48、72 h的抑制率均增高（P<0.05）。与空白组比较,DNR组MDR1 mRNA表达增高 （P<0.05）;与对照兔血清组比较,对照兔血清+DNR组MDR1 mRNA表达增高（P<0.05）;与含药兔血清组比较,含药兔血清+DNR组MDR1 mRNA表达降低（P<0.05）。与空白组比较,DNR组P-gp表达量增高,但差异无统计学意义（P>0.05）;分别与DNR组、含药兔血清组比较,含药兔血清+DNR组P-gp表达量均明显降低（P<0.05）。结论益气养阴方可逆转KG1a干细胞对DNR的耐药性,其机制可能与其协同DNR降低多药耐药基因编码的P-gp蛋白表达,从而提高对DNR的敏感性。     

中西医个体化分层治疗老年急性髓系白血病回顾性分析

目的回顾性分析中西医个体化分层治疗老年急性髓系白血病(AML)的临床疗效和不良反应。方法采用回顾性研究方法,根据患者合并的基础疾病、体力状态(ECOG)评分、治疗方法将54例老年AML患者分为A组(扶正祛邪方加减+标准剂量化疗组,19例)、B组(扶正祛邪方加减+减低剂量化疗组,18例)、C组(扶正祛邪方加减姑息治疗组,17例),分析患者骨髓缓解率、生存时间、中医证候疗效和不良反应。结果54例患者缓解率为68.5%(37/54),平均生存时间为(12.9±6.0)个月,中位生存时间为13个月,1年及以上生存率为55.6%(30/54),中医证候总有效率为83.3%(45/54),患者出现感染、胃肠道反应、心脏毒性、肝肾毒性的发生率分别为25.9%(14/54)、16.7%(9/54)、11.1%(6/54)、7.4%(4/54)。除中医证候疗效外,C组其余指标均低于A、B组(P0.05)。结论中西医个体化分层方案可提高老年AML临床疗效,减少不良反应的发生,提高生存质量,增加远期疗效。